期刊简介
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首页>河北医药杂志
- 杂志名称：河北医药杂志
- 主管单位：河北省卫生和计划生育委员会
- 主办单位：河北省医学情报研究所
- 国际刊号：1002-7386
- 国内刊号：13-1090/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：河北省优秀期刊期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 维普收录(中)
应用 RNA 干扰技术下调 ANXA3表达的 MDA-MB-231乳腺癌细胞株的建立
周涛；杨丽；刘亮；巨英超
关键词：乳腺癌, RNA干扰, 膜联蛋白A3, 转染
摘要：目的：建立针对膜联蛋白A3（Annexin A3， ANXA3）的shRNA稳定转染的乳腺癌细胞株MDA-MB-231，为后续进一步研究奠定基础。方法荧光定量RT-PCR及western blot方法检测两种乳腺癌细胞株（ MDA-MB-231及MCF-7）中ANXA3 mRNA及蛋白表达水平。构建沉默ANXA3基因的shRNA质粒3个（ ANXA3-sh1-3）及阴性对照质粒，脂质体法转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231；选出ANXA3沉默效果好的干扰质粒做后续实验。嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞；Western blot 方法检测转染后细胞中ANXA3蛋白表达水平。结果 MDA-MB-231细胞中 ANXA3 mRNA及蛋白表达水平显著高于MCF-7中的表达（ P ＜0 k．05）；成功构建3个针对ANXA3基因的shRNA质粒；转染ANXA3-sh1～3及阴性对照质粒后MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平分别为（0．0196±0．0002）、（0．0085±0．0002）、（0．0220±0．0035）、（0．0661±0．0057），未转染的MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平为（0．0692±0．0050），脂质体组MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平为（0．0652±0．0118），ANXA3-sh2对MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA沉默效率高，达87．72％，因此后续实验选择ANXA3-sh2；嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞分别命名为MDA-MB-231-Sh及MDA-MB-231-NC细胞。 Western blot检测结果显示，MDA-MB-231-Sh细胞中ANXA3蛋白显著低于MDA-MB-231及MDA-MB-231-NC细胞中的表达（ P ＜0．01）。结论 MDA-MB-231细胞较MCF-7细胞高表达ANXA3，成功的建立了稳定下调ANXA3表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-231，为后续进一步研究ANXA3的表达及特性打下基础。
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